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组氨酸标签(His-tag)蛋白分离纯化精品(L00666/L00885/L00776)

组氨酸标签(His-tag)是由6个组氨酸组成的短肽,分子量很小,不会遮盖融合蛋白中其他蛋白的表位和结构域,也不会影响蛋白的结构和功能。带有His标签的蛋白,与琼脂糖凝胶或磁珠上的螯合金属离子Ni2+形成配位键特异性的结合,而被纯化。黄金城集团提供His标签蛋白分离纯化的镍填料、镍磁珠和镍填料预装柱等,用于His标签蛋白的分离纯化。

Ni2+离子的螯合剂有:三配位的亚氨基二乙酸(IDA)、四配位的氮川三乙酸(NTA)和五配位的三(羧甲基)乙二胺(TED)。蛋白质的吸附量的排列顺序为:IDA>NTA>TED;还原剂的耐受力的排列顺序为:TED>NTA>IDA。

螯合金属Ni2+离子的螯合剂是偶联在琼脂糖凝胶介质上的,一般4%的琼脂糖凝胶基质适用于手动或蠕动泵的重力柱纯化,黄金城集团提供的填料有Ni-IDA亲和层析介质(L00223I)、Ni-NTA纯化介质( L00250)。一般6%的琼脂糖凝胶基质可耐受0.3MPa压力,适用于AKTA等纯化设备,黄金城集团提供的填料有:Ni-IDA Resin FF(L00465)、 Ni-NTA填料High Affinity Ni-Charged Resin FF(L00666)、Ni-TED填料High Affinity Ni-TED Resin FF(L00885),预装柱有:Ni-IDA Resin FF预装柱(L00684)和Ni-NTA预装柱High Affinity Ni-Charged Resin FF Prepacked Column(L00683)。

  • His标签蛋白纯化介质Hot

  • His标签蛋白纯化磁珠

  • Ni-IDA/NTA预装柱

  • 镍纯化填料/磁珠选择指南

镍填料

Ni-NTA填料

High Affinity Ni-Charged Resin FF(L00666)是一种6%高交联琼脂糖基质,共价偶联螯合剂NTA,通过四个配位键结合Ni2+,高亲和性纯化多组氨酸标记的重组蛋白。High Affinity Ni-Charged Resin FF具有低的Ni2+泄漏,高的蛋白质结合能力和稳定性,并可耐受蛋白质纯化中多种化学试剂。这使得Ni-NTA填料成为了纯化6x His标签融合蛋白的最佳选择。

  • 表1. Ni-NTA亲和层析介质的特性
    骨架基质 6%交联的琼脂糖凝胶
    平均粒径 90µm(45-165 µm)
    配体 NTA
    载量 ≥50mg/ml,即50mg含His标签的目的蛋白(34KD)/ml填料
    存储溶液 20%乙醇(纯填料体积占比50%)
    存储温度 2-8°C,避免冻存
    重复使用次数 可重复多次使用
  • 应用案例

    1、实验条件

    • 仪器:蠕动泵,玻璃层析柱
    • 样品:Recombinant Protein A in E.coli extract(目的蛋白分子量:34KD)
    • 样品体积:21L大肠杆菌裂解液(菌泥来自70L*2发酵罐)
    • 柱体积:约4.1L(D:200mm;H:13.1cm)
    • 平衡:60 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0;流速500ml/min,5倍柱体积
    • 上样:60 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0;流速500ml/min
    • 洗杂:60 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10-20 mM imidazole, pH 8.0;流速700ml/min,10倍柱体积
    • 洗脱:60 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0;流速500ml/min
    • 溶液置换:透析或超滤至1*PBS溶液中

    2、实验结果

    L00666纯化测试SDS-PAGE分析图

    图1. L00666纯化测试SDS-PAGE分析图

    实验结果说明:Ni-NTA纯化载量高,结合力强,纯度高

  • 订购信息
    产品编号 名称 数量 价格 操作
    L00666
    High Affinity Ni-Charged Resin FF
    ¥403.00
     

Ni-TED填料

High Affinity Ni-TED Resin FF(L00885)是一款新型的固定化金属螯合层析(IMAC)填料,是将TED偶联至6%琼脂糖凝胶介质上,通过五个配位键螯合Ni2+离子。该填料主要用于捕获和纯化分泌到真核表达培养基上清中的组氨酸标签(His-tag)蛋白。与其它螯合剂填料相比,High Affinity Ni-TED resin具有更强的组分兼容性,可以在含有一定浓度的EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白的高效纯化。

  • 表2. Ni-TED亲和层析介质的特性
    骨架基质 高交联的6%琼脂糖凝胶
    平均粒径 90μm(45~165μm)
    配体 TED
    动态载量 10mg/ml,即10mg含His标签的目的蛋白(34KD)/ml填料
    耐受压力 0.3MPa,3bar
    推荐流速 150-600cm/h
    储存溶液 20%乙醇(纯填料体积占比50%)
    储存温度 2~8℃,避免冻存
    重复使用次数 可重复多次使用
  • 应用案例
    Ni-NTA和Ni-TED耐受化学试剂的对比实验

    图2. Ni-NTA和Ni-TED耐受化学试剂的对比实验

    实验结果说明:Ni-TED对化学试剂的耐受性略高于Ni-NTA

  • 订购信息
    产品编号 名称 数量 价格 操作
    L00885
    High Affinity Ni-TED Resin FF
    ¥1253.00
     

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